Набор для синтеза первой цепи кДНК HiScript IV (+очиститель геномной ДНК)
R412-00 10 rxns
R412-01 50 rxns
R412-02 100 rxns
Описание продукта
HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) — это четвертое поколение серии HiScript для синтеза первой цепи кДНК с использованием тотальной РНК или поли А + РНК в качестве матриц. По сравнению с предыдущими версиями, HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) еще больше повышает эффективность обратной транскрипции, включая более сильную способность к удлинению, более высокую скорость реакции и более высокую устойчивость к ингибиторам, особенно подходит для количественного определения по нисходящей линии ПЦР и амплификации длинных фрагментов кДНК. Этот продукт содержит предварительную смесь HiScript IV RTase, ингибитора РНКазы, dNTP Mix и т. д., и необходимо добавлять только соответствующие праймеры обратной транскрипции в соответствии с последующими экспериментами. Набор предоставляет модуль элиминации геномной ДНК, где 5 × gDNA wiper Mix в наборе может быстро удалять загрязнения геномной ДНК при температуре 42 °C в течение 2 минут, обеспечивая надежные и аутентичные экспериментальные данные.
Функции
- Более длинные ампликоны: до 15 кб кДНК.
- Более высокая эффективность обратной транскрипции: более низкое значение C T.
- Более быстрая реакция: эффективная обратная транскрипция за 5 минут.
Компоненты
Хранилище
Хранить при температуре от -30 до -15 °C и транспортировать при температуре ≤0 °C.
Производительность
Расширенные возможности расширения
Используя в качестве матрицы тотальную РНК из клеток 293T, реакции обратной транскрипции были проведены с использованием Vazyme #R412, Vazyme #R312 и других коммерчески доступных продуктов обратной транскрипции (поставщик A, B) в идентичных условиях. Полученную кДНК затем амплифицировали с помощью 2× Vazyme LAmp Master Mix (Dye Plus) (Vazyme #P312) для получения целевых фрагментов различной длины.
Как показано на рисунке, все протестированные обратные транскриптазы успешно синтезировали фрагменты кДНК длиной 9,9 кб. Однако для фрагментов кДНК длиной 15 кб R412 показала более высокий выход кДНК по сравнению с R312 и значительно превзошла продукты обратной транскрипции от поставщиков A и B.
Более высокая эффективность обратной транскрипции
Используя 100 нг РНК из животных клеток, тканей животных и растительных тканей в качестве матриц, реакции обратной транскрипции были проведены с использованием Vazyme #R412, Vazyme #R423, Vazyme #R312 и других коммерчески доступных реагентов для обратной транскрипции (поставщик A, B) в соответствии с их протоколами. Полученную кДНК количественно определяли для нескольких генов с помощью количественного ПЦР-анализа.
Как показано на рисунке, Vazyme #R412 и Vazyme #R423 стабильно демонстрируют более низкие значения Ct в различных тестовых системах, превосходя Vazyme #R312 и продукты обратной транскрипции от Поставщика A и B.
Более высокая скорость реакции
Используя в качестве матрицы тотальную РНК из клеток 293T, обратную транскрипцию проводили с помощью Vazyme #R412, Vazyme #R312 и других коммерчески доступных продуктов обратной транскрипции (поставщик A, B) по соответствующим протоколам с различным временем реакции (5 мин, 10 мин, 15 мин и 30 мин). Полученную кДНК затем амплифицировали с помощью Vazyme #P312 для получения целевого фрагмента длиной 9,9 кб.
Как показано на рисунке, большинство обратных транскриптаз эффективно амплифицировали фрагмент кДНК длиной 9,9 кб в течение 30 минут. Однако даже при времени реакции всего 5 минут R412 всё ещё демонстрировал превосходную эффективность обратной транскрипции, превосходя Vazyme #R312 и продукты обратной транскрипции от Поставщиков A и B.
